【小贝离心Protocol】超速离心方法制备无外泌体血清

以外泌体为代表的细胞外囊泡是近几年研究的热点，目前的外泌体研究主要通过研究体外培养细胞来源的外泌体，分析其在体内外的功能作用。一般的血清FBS中含有供体细胞自然分泌的大量Exosomes，而用于Exosome研究的细胞必须提前更换无外泌体的血清进行培养，以减少对后续实验结果的污染。

目前市面上存在着商业化的无外泌体血清，然而由于其价格较高等因素，很多研究者选择自己制备无外泌体血清，而常用的主要是基于超速离心的无外泌体血清分离方法。根据实验结果，如下图，使用贝克曼超离自行纯化血清，可达到与商品化无EV 血清类似的效果^【1】。

无外泌体血清制备步骤：

1. 根据需要处理的血清体积选择合适的转子与超离管。推荐使用Type 45 Ti转子，一次离心可处理6×94ml。为避免污染，可选用贝克曼无菌无酶离心管#C14305，单独包装，即拆即用。

2. 在超净工作台，将普通血清置于超离管中，配平后，进行热封口。

3. 将封口后的超离管放于离心机Type 45 Ti转子中，并加入相应适配器（如果选用#C14305无菌无酶离心管，则需要#342697适配器），然后拧紧转头盖。

4. 设置离心程序：4℃，120,000 ×g，离心18小时（也有研究者选择100,000 ×g离心18小时^【2】）。

5. 离心结束后，回收上清液，为避免污染，在超净工作台操作。

6. 收集得到无外泌体血清，并储存于-20℃中备用。

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• 最大 RPM – 45,000

• 最大 RCF - 235,000 x g

• k 系数 - 133

• 离心管数量/体积/大小/尺寸：

  • 6 x 94 mL

  • 1 ? x 4 in.

  • 38 x 102 mm

• 转头容量 - 564 mL

参考文献

【1】https://www.beckman.com/resources/reading-material/application-notes/exosome-depleted-fbs-using-beckman-coulter-centrifugation

【2】Tian Y, Gong M, Hu Y, Liu H, Zhang W, Zhang M, Hu X, Aubert D, Zhu S, Wu L, Yan X. Quality and efficiency assessment of six extracellular vesicle isolation methods by nano-flow cytometry. Journal of Extracellular Vesicles. 9: 1697028. PMID 31839906